Descripción del proyecto
PROPONEMOS COMBINAR EL POTENCIAL DE LA MICROSCOPIA DE FUERZA ATOMICA (AFM) Y DE LOS BIOSENSORES NANOMECANICOS PARA CARACTERIZAR LAS PROPIEDADES MECANICAS DE PARTICULAS DE CALICIVIRUS FELINO (FCV) ANTES DEL MONITOREO EN TIEMPO REAL DE SU INTERACCION CON LAS CELULAS EUCARIOTICAS,NUESTRO CONOCIMIENTO DE LAS PROPIEDADES MECANICAS DE LAS CAPSIDES VIRICAS INDIVIDUALES SE BASA EN LOS DATOS EXPERIMENTALES DERIVADOS DE ENSAYOS DE NANOINDENTACION REALIZADOS CON AFM, ESTO NOS PERMITE DETERMINAR DIFERENTES PARAMETROS QUE DESCRIBEN DISTINTAS CARACTERISTICAS MECANICAS PARA DIFERENTES CLASES DE VIRUS, QUE SE PUEDEN CORRELACIONAR DIRECTAMENTE CON EL CICLO DE REPLICACION VIRAL, LA MAYORIA DE LOS VIRUSES NECESITAN ROMPERSE PARA INFECTAR LA CELULA HUESPED, POR LO TANTO, ES DE GRAN IMPORTANCIA COMPRENDER LA RELACION ENTRE LAS PROPIEDADES MECANICAS Y LAS FUNCIONES BIOLOGICAS DE LAS CAPSIDAS VIRALES,PARALELAMENTE AL AFM, LOS BIOSENSORES NANOMECANICOS OFRECEN PROPIEDADES SIN PRECEDENTES PARA LA DETECCION SIN MARCADORES Y CON ALTA SENSIBILIDAD DE FUERZAS POR DEBAJO DEL ATTONEWTON Y DE MASA AL NIVEL DE UN SOLO DALTON, INVESTIGACIONES RECIENTES HAN DEMOSTRADO QUE ESTA TECNICA TAMBIEN SE PUEDE USAR CON EXTREMA SENSIBILIDAD PARA DETECTAR LA ACTIVIDAD METABOLICA DE BACTERIAS O EL CAMBIO DE MASA DEL ORDEN DEL PG EN CELULAS DE MAMIFEROS, LA DETECCION DEL MOVIMIENTO NANOMECANICO DE MEMBRANAS CELULARES NO ES INVASIVA Y NO DEPENDE DEL USO DE MARCADORES FLUORESCENTES O NANOPARTICULAS, LA VELOCIDAD DEL MOVIMIENTO DEBE REFLEJAR LOS PROCESOS METABOLICOS ACTIVOS QUE IMPULSAN EL MOVIMIENTO NANOMECANICO,EL SISTEMA VIRAL UTILIZADO EN ESTE PROYECTO SERA EL CALICIVIRUS FELINO [8-9], ES DE GRAN INTERES EN LA INVESTIGACION VETERINARIA, YA QUE CAUSA UNA ENFERMEDAD SIGNIFICATIVA EN LOS FELINOS, PERO TAMBIEN EN LA SALUD HUMANA, YA QUE SE UTILICE COMO SISTEMA MODELO PARA LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE OTROS CALICIVIRUS COMO EL NOROVIRUS QUE SON RESPONSABLES DE LA GASTROENTERITIS EN SERES HUMANOS, TAMBIEN PODEMOS GENERAR PARTICULAS QUIMERICAS DERIVADAS DEL VIRION MODIFICADO CON ANTICUERPOS NEUTRALIZANTES O NO NEUTRALIZANTES O CON TROPISMO EXPANDIDO PARA LA INFECCION DE CELULAS DE MONO,EN EL PROYECTO ACTUAL, LA COMBINACION SIMULTANEA DE LA TECNICA DE NANOINDENTACION CON DETECCION NANOMECANICA RAPIDA Y ALTAMENTE SENSIBLE, PERMITIRA CORRELACIONAR LAS PROPIEDADES MECANICAS DE LA CAPSIDA VIRAL CON SU INFECTIVIDAD O PERMEABILIDAD A LA MEMBRANA CELULAR, ADEMAS, LA COMPLEMENTARIEDAD DE AMBAS TECNICAS APORTARA UNA NUEVA PERSPECTIVA PARA COMPRENDER EL ORIGEN MECANICO DEL CICLO VIRAL, ESTO ES PARTICULARMENTE RELEVANTE EN EL DISEÑO DE VACUNAS Y TAMBIEN EN EL DESARROLLO DE NANOCONTENEDORES PARA LA ADMINISTRACION DE MEDICAMENTOS,PROPONEMOS I) CARACTERIZAR LAS PROPIEDADES MECANICAS DEL CALICIVIRUS FELINO, FCV, Y TAMBIEN DE PARTICULAS VIRALES DERIVADAS DE FCV, CON MODIFICACIONES ESTRUCTURALES O QUIMICAS, (I) DESARROLLAR UNA METODOLOGIA PARA MEDIR CON BIOSENSORES NANOMECANICOS LA INTERACCION ENTRE FCV Y CELULAS EUCARIOTAS FELINAS, DETECTAREMOS LA FLUCTUACION DE LA MEMBRANA CELULAR EN CONDICIONES FISIOLOGICAS O VARIACIONES DE MASA Y RIGIDEZ DE LA CELULA EN MEDIO HUMEDO CONTROLADO, (III) DISEÑAREMOS Y OPTIMIZAREMOS UNA ESTRATEGIA DE SISTEMA NANOMECANICO PARA LA DETECCION EN TIEMPO REAL DE LA INFECCION VIRAL, ANALIZAREMOS LAS ETAPAS DE INTERACCION DEL VIRUS CON CELULAS UTILIZANDO LOS DATOS COMPLEMENTARIOS DE NANOINDENTACION Y DETECCION NANOMECANICA, AFM\MEMS\VIRUS\CELLS