Descripción del proyecto
TANTO LA MEJORA DE LAS CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS DEL FRUTO MADURO COMO EL ALARGAMIENTO DE LA VIDA POSTCOSECHA SIGUEN SIENDO OBJETIVOS PRIORITARIOS DE LOS PROGRAMAS DE MEJORA GENETICA EN FRESA QUE AUN NO HAN SIDO RESUELTOS, PREVIAMENTE A LO LARGO DEL PROYECTO COORDINADO AGL2014-55784-C2-R, HEMOS CARACTERIZADO VARIOS FACTORES DE TRANSCRIPCION (FT) QUE REGULAN LA MADURACION DEL FRUTO, SE ANALIZO EL PAPEL DE LAS PECTINASAS EN LOS CAMBIOS EN TEXTURA DEL FRUTO, Y SE INICIARON ESTUDIOS SOBRE LOS CAMBIOS EPIGENETICOS DURANTE LA MADURACION Y QUE HOY DIA YA SE SABE QUE JUEGAN PAPELES IMPORTANTES EN PROCESOS FISIOLOGICOS COMO PUEDE SER MADURACION DEL FRUTO DE FRESA, EN EL PRESENTE PROYECTO SE PRETENDE COMPLETAR Y PROFUNDIZAR EN LOS MECANISMOS MOLECULARES DE INTERES BIOTECNOLOGICO QUE SON RESPONSABLES DE LA MADURACION DEL FRUTO Y AL MISMO TIEMPO DESARROLLAR EL SISTEMA DE EDITADO CRISPR-CAS9, PARA OBTENER PLANTAS DE FRESA NO TRANSGENICAS PERO CON CARACTERISTICAS CONCRETAS MODIFICADAS Y QUE AUMENTEN LA CALIDAD DE FRUTO, POR ELLO, EN EL PRESENTE PROYECTO SE PROPONE: 1) CARACTERIZAR FUNCIONALMENTE, DOS FT (FAWRKY, FAERF2) Y UNA PROTEINA REGULADORA FACAR IMPLICADOS EN EL PROCESO DE MADURACION, 2) DESARROLLAR LA TECNICA CRISPR/CAS9 PARA LA OBTENCION DE PLANTAS NO TRANSGENICAS Y SU APLICACION PARA EDITAR DOS FTS PREVIAMENTE CARACTERIZADOS Y QUE DAN FRUTOS DE MAYOR CALIDAD Y MEJORES CARACTERISTICAS POSTCOSECHA, 3) AUMENTAR NUESTRO CONOCIMIENTO DE METILACION DURANTE LA MADURACION PUESTO QUE LOS ESTUDIOS REALIZADOS CON EL FRUTO DE TOMATE HAN DEMOSTRADO QUE ESTA METILACION DEL ADN REPRESENTA UN INTERRUPTOR BIOLOGICO QUE CONTROLA ESTE PROCESO, DE HECHO, PREVIENE QUE EL FRUTO MADURE INCLUSO EN PRESENCIA DE ETILENO, LA HORMONA QUE DISPARA ESTE PROCESO EN TOMATE, DE ESA FORMA, LA ADICION DE AZACITIDINA, UN AGENTE HIPOMETILANTE, CONSIGUE ACELERAR LA MADURACION EN ESTE FRUTO, LO CONTRARIO OCURRE SI SE SILENCIA UNA DEMETILASA ESPECIFICA DE FRUTO (SLDML2): LA MADURACION SE RETRASA, EN LOS ESTUDIOS DESARROLLADOS EN EL PROYECTO ANTERIOR, HEMOS PODIDO COMPROBAR QUE LA AZACITIDINA TIENE EL EFECTO CONTRARIO EN LA FRESA, TRAS SER INYECTADO EN EL FRUTO DE LA FRESA TIENE LUGAR UN RETRASO CONSIDERABLE EN EL PROCESO DE MADURACION, TODOS ESTOS RESULTADOS NOS ANIMAN A INVESTIGAR LOS NIVELES DE METILACION EN LOS GENES DURANTE LA MADURACION, ASI COMO LOS EFECTOS PROVOCADOS POR LA AZACITIDINA, Y EL PAPEL BIOLOGICO QUE DESEMPEÑAN LAS DEMETILASAS DE ADN EN ESTOS FRUTOS, PORQUE ESTAMOS CONVENCIDOS QUE CONTROLANDO LA METILACION DE DETERMINADOS GENES SEREMOS CAPACES DE CONTROLAR LA MADURACION, 4) POR OTRO LADO SOMOS CONSCIENTES DE LA REVOLUCION QUE HAN SUPUESTO LOS LNCRNA (ARN LARGOS NO CODIFICANTES) TRAS HABER SIDO DESCUBIERTO COMO GENES REGULADORES MAESTROS IMPLICADOS EN UNA ENORME CANTIDAD DE PROCESOS BIOLOGICOS, ENTRE LOS QUE DESTACA LA METILACION DE LOS GENES, LA APERTURA DE LA CROMATINA, Y UN LARGO ETC, CON ESTE PROYECTO QUEREMOS INICIAR LOS ESTUDIOS DE AQUELLOS LNRNA QUE PUDIERAN ESTAR IMPLICADOS EN LA MADURACION DEL FRUTO DE FRESA, DISPONEMOS PARA ELLO DE UNA SECUENCIACION RNA-SEQ MASIVA DE LECTURAS PAREADAS 2X150BP Y STRANDED, ES NUESTRA INTENCION DESCUBRIR ESTOS LNCRNA, DETERMINAR EL PERFIL DE EXPRESION DE ALGUNOS DE ELLOS, Y DETERMINAR EL PROBABLE PAPEL BIOLOGICO QUE DESEMPEÑAN TRAS EL SILENCIAMIENTO O SOBREEXPRESION TRANSITORIA DE LOS MISMOS, CRISPR-CAS9\METILASAS\EPIGENÉTICA\RNA-SEQ\LNCRNA