Descripción del proyecto
TUMATRIX-IMAGE ES UN SUBPROYECTO DEL PROYECTO COORDINADO TUMATRIX. EN EL MARCO DE DICHO PROYECTO, TUMATRIX-IMAGE SE ENCARGA DE ASPECTOS RELACIONADOS CON LA MICROFLUIDICA, LA GENERACION Y EL ANALISIS DE IMAGEN MULTIMODAL.RELATIVO A LA MICROFLUIDICA, TUMATRIX-IMAGE DISEÑARA, FABRICARA Y VALIDARA SISTEMAS MICROFLUIDICOS PARA LA GENERACION Y OBSERVACION MICROSCOPICA DE ORGANOIDES CONVENCIONALES Y ORGANOIDES GENERADOS EN INTERFACES AIRE-LIQUIDO. PARTIENDO DE UN DISPOSITIVO SIMPLIFICADO PARA LA GENERACION Y MONITORIZACION SIMULTANEA DE MULTIPLES ORGANOIDES, PASAREMOS A UN DISEÑO EN MODO HIGH-THROUGHPUT QUE PERMITIRA GENERAR ORGANOIDES DE TAMAÑO Y LOCALIZACION CONTROLADA. FINALMENTE, UN DISPOSITIVO NOVEDOSO DE TRES CAPAS PERMITIRA GENERAR ORGANOIDES EN INTERFAZ AIRE-LIQUIDO EN UN FORMATO MICROFLUIDICO.EN RELACION CON LOS ASPECTOS DE ADQUISICION DE IMAGEN, TUMATRIX-IMAGE DEFINIRA Y VALIDARA PROTOCOLOS DE MARCACION PARA LA OBSERVACION IN VITRO DE LOS ORGANOIDES TUMORALES MEDIANTE MICROSCOPIA MUTIFOTON Y LIGHT-SHEET. ESTOS PROTOCOLOS SE BASARAN EN TRANSFECCION DE PROTEINAS CLAVE Y EL USO DE MARCADORES COMPATIBLES CON LA VIABILIDAD DE LAS CELULAS. A CONTINUACION, SE PONDRAN A PUNTO PROTOCOLOS PARA EL ANALISIS IN SITU DE ELEMENTOS RELEVANTES DEL MICROENTORNO TUMORAL (MET) EN TEJIDOS FIJADOS. ESTOS PROTOCOLOS INCLUIRAN LA OBSERVACION DE ORGANOIDES INTACTOS MEDIANTE MICROSCOPIA CONFOCAL, MULTIFOTON Y LIGHT-SHEET POSTERIORMENTE A SU CLARIFICACION Y EXPANSION, ASI COMO LA VISUALIZACION DE PANELES (HASTA 8) DE ELEMENTOS DEL MET (CELULAS TUMORALES, Y CELULAS DE ORIGEN MIELOIDE Y LINFOIDE) EN SECCIONES FINAS DE LOS ORGANOIDES TEÑIDAS MEDIANTE INMUNOTINCION MULTIPLEX. FINALMENTE, SE PONDRAN A PUNTO PROTOCOLOS PARA LA VISUALIZACION MEDIANTE ULTRASONOGRAFIA DE LA VASCULATURA GENERADA PARA ALIMENTAR ORGANOIDES MURINOS IMPLANTADOS SUBCUTANEAMENTE EN RATONES SINGENICOS, Y MEDIANTE MICROSCOPIA INTRAVITAL CAPTURAR LAS INTERACCIONES ENTRE NEUTROFILOS Y LAS CELULAS TUMORALES, TAMBIEN EN LOS ORGANOIDES IMPLANTADOS.EN RELACION CON LOS ASPECTOS DE ANALISIS DE IMAGEN DEL PROYECTO TUMATRIX-IMAGE ACTUALIZARA ALGORITMOS DE FILTRADO Y SEGMENTACION DE LAS IMAGENES GENERADAS, QUE SERAN ESPECIFICOS PARA CADA UNA DE LAS MODALIDADES DE IMAGEN UTILIZADAS EN EL PROYECTO. LAS METRICAS ESPERADAS SON LA MORFOLOGIA Y EL TAMAÑO DE LOS ORGANOIDES, EL NIVEL DE VASCULARIZACION DE ESTOS, Y LAS RELACIONES ESPACIALES ENTRE ELEMENTOS DEL MET. CON RESPECTO A ESTE ULTIMO PUNTO, APROVECHAREMOS LAS POSIBILIDADES QUE PROPORCIONA LA IMUNOTINCION MULTIPLEXADA PARA ACTUALIZAR NOVEDOSOS ALGORITMOS BASADOS EN INTELIGENCIA ARTIFICIAL DISEÑADOS POR EL GRUPO, PARA REALIZAR UN ANALISIS MULTIESCALA DE EL MET EN TRES NIVELES DE COMPLEJIDAD ESPACIAL: FENOTIPOS CELULARES, RELACIONES DE VECINDARIO ENTRE FENOTIPOS, E INTERACCIONES ENTRE VECINDARIOS.APLICANDO LAS HERRAMIENTAS DESCRITAS LA LOS ORGANOIDES CRECIDOS EN MATRICES DERIVADAS EL ESTROMA DE TUMORES, Y EN COLABORACION Y COMPLEMENTARIEDAD CON LAS DESARROLLADAS EN EL OTRO SUBPROYECTO, (TUMATRIX-MODELLING) CONTRIBUIREMOS AL OBJETIVO CIENTIFICO PRINCIPAL DE TUMATRIX, QUE ES ENTENDER LA RELACION EXISTENTE ENTRE LAS PROPIEDADES Y LA COMPOSICION DEL MET Y EL FENOTIPO DE LOS TUMORES, CON UN ENFASIS ESPECIAL EN LA COMPRENSION DEL ROL QUE LAS PROPIEDADES MECANICAS DE LA MATRIZ EXTRACELULAR TIENEN EN LA ACTIVIDAD METABOLICA DE LOS TUMORES. ECANOBIOLOGIA\MULTIPLEX\MICROSCOPIA\INTELIGENCIA ARTIFICIAL\ANALISIS DE IMAGEN\MICROFLUIDICA\ORGANOIDES\CANCER